Western blot樣品製備-Lysis buffer選擇大不同
在Western blot樣品製備步驟中，首要步驟就是將細胞或組織樣品裂解，而所使用的裂解液有非常多種。裂解液會依其成分而有不同的蛋白溶解能力，其中含有sodium dodecyl sulfate (SDS) 和其他離子表面活性劑的裂解液被認為是效果最好的，因此其蛋白產量也相對來的比較高。
然而在選擇裂解液時也需要考慮到後續的實驗應用，若是要檢測非變性條件的樣品時，應使用不含表面活性劑的裂解液，或是改用較溫和的非離子表面活性劑(NP-40, Triton X-100) 的裂解液。
依照蛋白質的位置選擇適合的裂解液
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Protein location |
Buffer recommended |
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Whole cell |
NP-40 |
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Cytoplasmic (soluble) |
Tris-HCl |
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Cytoplasmic (cytoskeletal bound) |
Tris-Triton |
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Membrane bound |
NP-40 or RIPA |
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Nuclear |
RIPA or use nuclear fraction protocol* |
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Mitochondria |
RIPA or use mitochondrial fraction protocol* |
*一些特定或主要表現在某些細胞位置的蛋白，使用該特定的分離萃取液會比全細胞或組織裂解液獲得目標蛋白還要來的多。尤其是要萃取弱表達的蛋白更顯得有幫助。
Abcam多種裂解液供您選擇
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Cat. No. |
Product |
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10X RIPA Buffer |
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Native lysis Buffer |
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10x Red Blood Cell (RBC) Lysis Buffer |
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Histone Extraction Kit |
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Nuclear Extraction Kit |
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Plasma Membrane Protein Extraction Kit |
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Mitochondria Isolation Kit for Cultured Cells |
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Mitochondria Isolation Kit for Tissue |
