酵素結合免疫吸附分析法Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA),是目前常見的生物檢測技術,利用抗體與抗原專一性結合的方式達到高靈敏度的檢測。
常見的生物樣品內的蛋白、抗體、小分子化合物等等分析物都可以使用ELISA的技術進行分析,依照不同的目的也可以分成定性與定量兩種檢測的類型。
在ELISA的技術中,依照不同的設計方式可以分成四種類型:
(1)直接法Direct ELISA (2)間接法Indirect ELISA (3)三明治法Sandwich ELISA (4)競爭法Competitive ELISA
接下來我們將一一說明每個方法的原理
(1)直接法Direct ELISA
將目標抗原固定在塑膠孔盤上,接著透過檢測抗體進行檢測。
此方法常用在篩選能夠辨識特定抗原的抗體
(2)間接法Indirect ELISA
將特定的capture 抗原貼附在塑膠孔盤上,抗原會與目標抗體免疫結合形成免疫複合物,最後使用detection抗體檢測免疫複合物。
此方法常用在檢測樣品中目標抗體的含量
(3)三明治法Sandwich ELISA
將capture抗體固定在塑膠孔盤上,結合目標抗原分析物,最後使用detection抗體檢測,因此形成capture抗體–抗原-detection抗體的三明治結構。
此方法常用在檢測混和樣品中抗原的濃度
(4)競爭法Competitive ELISA
將特定抗體固定在塑膠孔盤上,加入含有目標抗原的樣品以及帶有酵素標記的抗原與盤上的抗體結合。由於樣品內的抗原與帶有酵素標記的抗原具有競爭關係,因此從帶有酵素標記的抗原得到的訊號越高,代表樣品內的抗原濃度越低。
此方法也常用在檢測樣品中抗原的濃度
綜合以上,各個類型的ELISA方式,無論是直接型的檢測抗體,或是間接型的檢測抗體或蛋白上都會有酵素。此酵素通常會使用Horseradish Peroxidase(HRP)或Alkaline Phosphatase(AP),加入所對應的substrate進行反應會產生有顏色的最終產物,透過ELISA分析儀器就可以得知並分析訊號強度,進而推算出檢測目標的多寡。
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